《表1 本研究所用的PCR引物序列》
注:下划线代表限制性内切酶的酶切位点。
采用qRT-PCR进行基因的组织表达分析。Ap N-HX2基因引物为qRT-ApNHX2-F和qRT-ApNHX2-R,选择GAPDH作为内参基因[35],引物为GAPDH-F和GAPDH-R(表1)。qRT-PCR采用Fast SYBR Mixture试剂盒(康为世纪),利用美国ABI 7500 Fast实时荧光定量PCR仪(Life Technologies,Foster City,CA,USA)进行扩增。在10μL的反应体系中加入c DNA模板2μL,Ultra SYBR Mixture 5μL,ROX 0.2μL,正反向引物(10μM)各0.2μL,ddH2O 2.6μL。反应程序为95℃预变性10 min;95℃变性15 s,60℃退火1 min,共40个循环;60℃读取荧光值。检测每份样品的ApNHX2基因和GAPDH内参基因的Ct值,每份样品3次重复,实验数据采用2-ΔΔCt法进行相对定量分析[23]。采用SPSS17.0软件对实验结果进行单因素方差分析,利用Duncan法进行多组样本之间的差异显著性分析(P<0.05)[32]。
图表编号 | XD0074198100 严禁用于非法目的 |
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绘制时间 | 2019.04.01 |
作者 | 孙琦、黄薇、刘芳、金玉环、肖建旺、黄先忠 |
绘制单位 | 石河子大学生命科学学院特色植物基因组学实验室、石河子大学生命科学学院特色植物基因组学实验室、石河子大学生命科学学院特色植物基因组学实验室、石河子大学生命科学学院特色植物基因组学实验室、石河子大学生命科学学院特色植物基因组学实验室、石河子大学生命科学学院特色植物基因组学实验室 |
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