《表1 HPV16E7突变引物》

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《HPV16 E7基因定向突变及表达产物免疫原性研究》

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注:斜体部分表示括号所示内切酶；＿表示突变碱基

HPV16E7蛋白由98个氨基酸组成，包含a、b、c 3区，为减少其转化活性和增强抗原性，在a区对21、24和26位氨基酸进行定点突变，即DLYCYEQ到GLYGYGQ。在C区，修订C61-G61，C94-G94锌指结合位点。突变按TaKaRa公司突变试剂盒说明书进行。使用primer premier5.0设计HPV16 E7突变引物，见表1。以pT-HPV16E7为模板，按重叠PCR方式，以引物PM1-F，PM1-R为引物进行PCR，其产物与T-Vector相连，测序正确的质粒命名为pT-16E7m1，其他的突变按上述方法进行，最后的突变命名为pT-HPV16mE7。