《表1 本实验构建的基因工程菌》

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《真菌细胞色素P450在大肠杆菌中的表达》

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利用Gel Extraction Kit（200）试剂盒对PCR扩增产物进行切胶回收和纯化。将获得的纯化产物和pET-28a（+）表达载体同时进行相应的限制性内切酶Nde I或Eco R I和Not I双酶切，酶切条件为37°C、3 h。酶切产物经过纯化后，利用T4连接酶将基因片段与表达载体于16°C连接5 h。连接产物经热激转化，导入E.coli BL21（DE3）感受态细胞中，孵育后涂布于含Kan抗性的LB平板。随机挑取转化子培养，提取质粒后进行酶切验证，阳性克隆进一步进行测序验证以确定无突变产生。正确构建的基因工程菌命名如表1所示。