《表1 PpHMGR基因全长扩增所需引物序列》

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《滇重楼3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶PpHMGR基因的克隆及分析》

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根据转录组数据获得的核苷酸序列设计克隆该基因的引物，最终筛选到特异引物序列（表1），以反转录获得的cDNA产物为模板，按照以下PCR反应体系进行扩增：模板1μL；前引1μL；后引1μL；Buffer 2μL；dNTP 2μL；Pfu酶0.5μL；ddH2O 12.5μL补足到20μL。PCR反应程序为：95℃预变性3 min；95℃变性30 s；57℃退火30 s；72℃延伸5 min；72℃7 min，16℃保存。对目的片段切胶回收，采用平末端连接方法连接到pLB vector载体，转化大肠杆菌DH5α菌株，在Amp抗性的LB平板上筛选，经PCR检测后选择阳性克隆送上北京擎科生物有限公司测序。