《表2 本试验所用引物Tab.2 Primers used in this study》

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《铝胁迫下金沙柚3个WRKY基因的生物信息学与表达分析》

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取上述存放于-80℃冰箱中的样品，按富含多糖的植物组织试剂盒RNAiso（Takara Biological Engineering （Dalian）Co.Ltd.，中国） 说明书分离提取总RNA。RNA样品的浓度、纯度、完整性和是否有基因组DNA污染等分别采用Qubit 2.0、Nanodrop、Aglient 2100、电泳方法检测。检测合格后，用于实时荧光定量PCR分析。利用实时荧光定量PCR技术分析3个WRKY在嫩根、老根、茎和叶中的表达图谱，分析铝胁迫处理后的响应表达，铝胁迫条件下与SA、H2O2以及SA与H2O2共同作用的表达图谱。实验所用的引物及CsActin内参信息见表2。以逆转录cDNA为模板，使用TB Green?Premix Ex Taq?II（Tli RNaseH Plus）试剂盒，在ABI 7900仪器上对目的基因的表达水平进行检测。qPCR反应体系为20μL，包括10μL SYBR Premix Ex Taq，上下游引物各0.6μL（10μmol/L），2μL cDNA（50 ng/μL），6.8μL去离子水。qPCR程序如下:95℃30 s，95℃5 s，60℃20 s，60℃收集荧光信号，45个循环，95℃溶解曲线，65℃15 s，42℃冷却。反应结束后绘制基因的溶解曲线，以判定产物的特异性。使用2-ΔΔCT方法计算基因的相对定量[28]。实时荧光定量PCR数据分析用SPSS 17.0和Microsoft Office Excel 2010进行统计分析，结果均用平均值±标准误表示。