《表2 主要蔬菜病毒检测引物》
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利用CTAB法，从疑似病毒病样本中提取病株总核酸。对于RNA病毒，先以提取的样品总核酸为模板，以各病毒的下游引物，利用Ta Ka Ra Reverse Transcriptase M-MLV（RNase H-）试剂盒合成病毒c DNA。反转录（10μL体系）方法:将含2μL模板、1μL下游引物、3μL ddH2O的混合样混匀后，70℃下反应10 min，迅速拿出，置冰上冷却3 min，依次加入含2μL 5×M-MLVBuffer、0.5μL dNTP mix（10 mmol·L-1）、0.5μL RTase M-MLV和1μL ddH2O的混合液，42℃反应1 h，70℃下15 min终止反应。PCR反应体系（总体积为10μL）:上述合成的cDNA或DNA病毒核酸模板1μL、6.7μL ddH2O，1μL 10×Taq Buffer、0.8μL dNTPmix（2.5 mmol·L-1）、前后引物各0.2μL（引物相关信息见表2），0.1μL TaKaRa Taq。反应程序:94℃预变性2 min；94℃变性30 s，X℃（根据表2各病毒检测引物的Tm值设定）退火30 s，72℃延伸1 min，循环35次；72℃延伸10 min；4℃终止反应。反应产物经1%琼脂糖凝胶电泳后在紫外灯下观察结果。
| 图表编号 | XD0048689700 严禁用于非法目的 |
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| 绘制时间 | 2019.01.16 |
| 作者 | 刘勇、李凡、李月月、张松柏、高希武、谢艳、燕飞、张安盛、戴良英、程兆榜、丁铭、牛颜冰、王升吉、车海彦、江彤、史晓斌、何自福、吴云锋、张德咏、青玲、严婉荣、杨学辉、汤亚飞、郑红英、唐前君、章松柏、章东方、蔡丽、陶小荣 |
| 绘制单位 | 湖南省农业科学院植物保护研究所、云南农业大学植物保护学院、云南农业大学植物保护学院、湖南省农业科学院植物保护研究所、中国农业大学植物保护学院、浙江大学农业与生物技术学院、浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所、山东省农业科学院植物保护研究所、湖南农业大学植物保护学院、江苏省农业科学院植物保护研究所、云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所、山西农业大学生命科学学院、山东省农业科学院植物保护研究所、中国热带农业科学院环境与植物保护研究所、安徽农业大学植物保护学院、湖南省农业科学院植物保护研究所、广东省农业科 |
| 更多格式 | 高清、无水印（增值服务） |
