《表2 实时定量PCR的引物序列》

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《有氧运动对大鼠骨骼肌和血清microRNA-24和eNOS表达的影响》

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采用Trizol法提取总RNA:取重量为100 mg的股四头肌放入1.5 m L的无RNA酶EP管中，加入1 m L trizol，用组织匀浆器进行匀浆，随后加入200μL氯仿，混匀，在12 000 r/min离心20min，取上清，加入等体积异丙醇，混匀，在12 000 r/min离心20min，弃上清，用75%的乙醇洗涤沉淀，用20μL DEPC水溶解沉淀，即获得总RNA溶液。用微量核酸蛋白定量仪定量后，取1μg的总RNA，用olig d T引物反转总m RNA，反转的程序为oligd T引物1μL，RNA 1μg，用DEPC水把体积补充到12μL；65℃保温5 min后，立即冷却，随后加10×Buffer 4μL、d NTPs 2μL，RNA inhibitor 1μL，AMV 1μL，混匀，42℃作用1 h后，70℃5 min终止反应。以c DNA为模板进行RT-q PCR的扩增，检测内皮一氧化氮合酶（e NOS）、神经一氧化氮合酶（n NOS）和诱导型一氧化氮合酶（i NOS）的表达水平。扩增条件为:95℃10 s，60℃10 s，72℃30 s，45个循环。从美国国立生物技术信息中心的数据库获得人e NOS、n NOS、i NOS及β-actin的m RNA序列，应用软件oligo6.65设计RT-q PCR扩增的引物，引物序列见表2。