《表1.PCR所用引物：3A蛋白104–115位氨基酸缺失口蹄疫A型标记病毒的构建》

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《3A蛋白104–115位氨基酸缺失口蹄疫A型标记病毒的构建》

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研究表明FMDV 3A蛋白的109–115位氨基酸（AEKNPLE）为免疫优势的B细胞表位，故本研究选取包含该区段的氨基酸104–115作为缺失的靶点。以已构建保存的pSK-A4为模板，分别用A/HN5321（+）/A/HN1 0 4-11 5（–）和A/HN1 0 4-115（+）/A/HN6767（–）引物分别扩增得到C片段和D片段。纯化回收的C和D片段等量混合作为模板，以OZ5321（+）/OZ6767（–）为引物扩增CD片段。CD片段用Hind III/Bgl II酶消化后回收约1450 bp的片段，pSK-A4质粒用Not I/Hind III酶消化后回收约1500 bp的片段，pSK-A1234用Not I/Bgl II消化后回收约8400 bp的片段。然后三片段连接、转化、提质粒，电泳和酶切鉴定得到重组质粒pQAHN/3A104-115。将酶切鉴定正确的重组质粒送西安擎科生物有限公司进行序列测定，验证构建重组质粒的正确性。3A蛋白104–115位氨基酸缺失FMDV基因组示意图见图1。