《表1 引物信息：茶尺蠖丝氨酸蛋白酶基因EoSP1的克隆、时空表达及对饥饿的表达响应》

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《茶尺蠖丝氨酸蛋白酶基因EoSP1的克隆、时空表达及对饥饿的表达响应》

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从本实验室茶尺蠖幼虫转录组数据库中得到1个SP基因片段的转录本序列，根据此序列分别设计特异性RACE引物（表1），以茶尺蠖幼虫cDNA为模板，采用高保真酶PrimeSTAR?Max DNA Polymerase(TAKARA，大连）进行PCR扩增，获取EoSP1基因全序列。PCR反应体系为：cDNA 1.0μL、Max 25μL、上下游引物各1.5μL、ddH2O 21μL。反应程序为：94℃预变性3 min；98℃变性10 s，55℃退火30 s，72℃延伸30 s，35个循环；72℃延伸10 min，4℃保存。采用1%琼脂糖凝胶检测RCR产物，将单一目标条带切胶回收，使用pClone007 Blunt Vector Kit(TSINGKE，北京）用于目的片段与克隆载体的构建，转化DH5α大肠杆菌，挑选单克隆进行菌液PCR，阳性克隆送测，引物合成和测序均由北京擎科生物科技有限公司（杭州）完成。