《表2 PICH干涉序列：可诱导型敲低PICH的MDA-MB-231细胞系的构建及鉴定》

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《可诱导型敲低PICH的MDA-MB-231细胞系的构建及鉴定》

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用ddH2O将合成的PICH干涉引物稀释至100 mmol/L；各取1.25μL互补单链与5μL 10×退火缓冲液加入42.5μL ddH2O中混匀，将混合液置于95℃水中加热10 min后，缓慢冷却至室温，完成引物退火；取5μg pLKO.1-tet-on载体质粒与5μL 10×酶切缓冲液混合，再用ddH2O补齐至45μL，最后分别加入2.5μL Eco RⅠ和AgeⅠ酶，配成酶切体系，37℃酶切4 h；利用核酸电泳分离酶切产物，并回收酶切片段产物；各取1μL酶切回收产物、10×T4缓冲液、T4DNA连接酶与7μL退火产物混匀配成10μL连接体系，37℃连接1 h；取5μL连接产物加入50μL大肠杆菌DH5α感受态细胞溶液中混匀，配成转化体系，冰浴30 min；快速将转化体系转移到42℃水浴锅中热激90 s，冰浴2～3 min；取400μL不含抗生素的无菌LB液体培养基加入装有转化体系的试管中，于37℃摇床上孵育1 h；室温低速离心3 min，弃300μL上清，重悬菌液后，均匀涂在含氨苄青霉素的LB平板上，37℃培养箱中过夜；菌落PCR鉴定，基因测序验证。