《表1 引物序列:毛竹茎秆伸长过程中赤霉素生物合成、降解和信号转导关键基因的鉴定及表达分析》

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《毛竹茎秆伸长过程中赤霉素生物合成、降解和信号转导关键基因的鉴定及表达分析》


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采用Trizol(TaKaRa公司)法提取毛竹幼苗的茎和叶组织的总RNA,用Prime ScriptTM RT Master Mix(TaKaRa公司)去除基因组DNA和反转录合成cDNA。引物的设计选择在每个基因非保守区域,扩增片段均为150 bp左右,PCR检测引物特异性(表1)。反应体系(10μL):5μL SYBR?Premix Ex TaqTM II(TaKaRa公司),0.8μL cDNA,0.4μL primer-F,0.4μL primer-R,3.4μL无菌水。反应条件为:95℃,7 min;预扩增95℃10 s,58℃10 s,72℃15 s,共40个循环。选取NTB为内参基因[28],以喷施清水的材料作为对照组设定为1,处理样品中每个基因的表达水平均以此为参照,以3次生物学重复结果用2-△△Ct的方法计算相对表达量[29],并进行差异显著性分析。