《表1 构建质粒所涉及到的引物》

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《解脂耶氏酵母表面展示β-淀粉酶与α-葡萄糖转苷酶及一步法由淀粉合成低聚异麦芽糖》

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Note:Underlines indicate restriction enzyme recognition sites.

β-amylase与GTase基因融合参考Wang等[15]引入linker（5?-TTAGGATCTAGATCTGCCGAATT A-3?），融合方式一种是5?-β-amylase-linker-GTase-3?（简称为βa-GT），另一种是5?-GTase-linker-β-amylase-3?（简称为GT-βa），融合所用的引物序列见表1。先以质粒pSWV-β-amylase为模板，Pβ1-F/Pβ1-R一对引物扩出β-amylase基因；以pSWV-GTase为模板，以PG1-F/PG1-R一对引物扩出GTase基因；以上述两轮PCR产物作为混合模板（含有GTase基因与β-amylase基因），以Pβ1-F与PG1-R一对引物扩出融合基因βa-GT，采用重组酶克隆法克隆到Bam HⅠ与XhoⅠ双切的载体pSWV-β-amylase中，构成重组质粒pSWV-βa-GT。