《表1 水貂Agouti基因克隆与601 bp插入检测所用引物》

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《601 bp SINE插入突变导致水貂Agouti基因沉默》

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除P20'用于构建601 bp插入突变的反向序列报告基因外，其他引物全部用于水貂Agouti基因克隆；P20还用于检测601 bp插入突变的群体分布和构建突变正向序列报告基因All the primers were used for cloning of mink Agouti gene，except P20'which was used for constructing the re

以犬（Canis lupus familiaris）、猫（Felis catus）、狐狸（Vulpes vulpes）、熊猫（Ailuropoda melanoleuca）、雪貂（Mustela putorius furo）、牛（Bos taurus）和人（Homo sapiens）的Agouti基因序列为模板，利用Primer Premier 6.0设计引物，由华大基因（北京）合成。所用引物及PCR扩增退火温度见表1。PCR反应体系:10×PCR Buffer 5μL，上下游引物（10μmol/L）各4μL，dNTPs（2.5 mmol/L）4μL，Trans Start Taq酶（10 U/μL）0.5μL，基因组200 ng，以ddH2O补足至50μL。反应程序:95℃4 min；95℃30 s，退火30 s，72℃2 min，36个循环；72℃终延伸10 min。扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，呈现单一扩增条带的样品送华大基因测序，并利用ContigExpress 3.0.0拼接测序结果。