《表1 HIF-1α-shRNA干扰序列》

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《慢病毒介导HIF-1α沉默对缺氧肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响》

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针对HIF‐1α基因（Genbank NM＿181054）利用软件设计的有效的RNAi序列5'‐GTTAC‐GTTCCTTCGATCAG‐3'，设计合成一对互补的寡核苷酸序列（DNA oligo）（表1） ，该DNA oligo包含有19个碱基正义链、6个核苷酸序列的loop环和互补19个碱基的反义链，在5'端分别加上限制性核酸内切酶AgeⅠ和EcoRⅠ的酶切位点，在3'端加入RNA polyⅢ聚合酶转录终止信号TTTTT，反义链5'加入终止信号互补序列。同时以一段不针对任何基因的无关序列作为阴性对照（negative control，NC）（即干扰对照组） 。将DNA oligo退火配对产生双链，通过其两端所含酶切位点采用T4连接酶与酶切后的慢病毒载体GV248进行连接，构建重组慢病毒质粒（HIF‐1α‐shRNA‐GV248和NC‐shRNA‐GV248），转入感受态大肠杆菌DH5α，挑取阳性克隆，GV248通用引物进行PCR电泳及测序鉴定。由上海吉凯化学技术有限公司合成并构建重组质粒。