《Table 1 Kinetic analysis of emission decay for Th T in the presence of egg lysozyme aggregation sam

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《基于ThT荧光寿命检测蛋清溶菌酶蛋白寡聚体》


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*The value of fluorescence lifetimeτwas calculated by the double-exponential fits,Y(τ)=a1eτ/τ1+a2eτ/τ2,which generates two lifetime values(τ1andτ2),and the corresponding amplitudes(a1and a2).The intensity-average lifetime〈τ〉,using the

利用二阶指数方程对不同孵育时间的蛋白聚集体的荧光寿命进行拟合[21],计算得出相应样品的ThT荧光寿命(见表1).结果表明,单体蛋白的荧光寿命时间很短(τ=0.5 ns).荧光光谱结果表明,ThT不能与单体蛋白结合,被激发后也不会产生发射荧光,因此单体蛋白样品内的ThT无荧光寿命(图4谱线a).孵育2 d时蛋白寡聚体的ThT具有明显的荧光寿命(图4谱线b),其寿命为1.06 ns,约为蛋白单体ThT寿命的2.0倍.这表明虽然利用荧光光谱技术无法检测蛋白寡聚体,但利用ThT的荧光寿命可以检测到寡聚体的形成,从而区分蛋白单体与寡聚体.纤维样蛋白聚集体的荧光寿命也明显长于寡聚体(图4谱线c),计算其ThT的荧光寿命约1.50~1.60 ns,约为寡聚体寿命的1.5倍.上述结果表明,利用时间分辨荧光技术检测ThT的荧光寿命可以区分蛋白单体、寡聚体及纤维样聚集体.