《表1 不同组别大鼠血浆HIS和血清MCT水平的比较(x±s,n=6)》

《表1 不同组别大鼠血浆HIS和血清MCT水平的比较(x±s,n=6)》   提示:宽带有限、当前游客访问压缩模式
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注(note):与阴性组相比,**P<0.01(compared with the negative group,**P<0.01)

采用荧光分光光度法对大鼠血浆HIS水平进行测定[19-21]。所使用的是由日本岛津公司生产的RF-5301(PC)S型荧光分光光度计,取血浆样品200μL,加重蒸水1.45 m L后,缓缓加入25%三氯乙酸0.35m L,3 500 r·min-1离心5 min,取上清液1.6 m L置于已加氯化钠1.5 g的10 m L带塞试管中,加入正丁醇4.0 m L和2.5 mol·L-1氢氧化钠溶液0.2 m L,立即混匀,震荡5 min。取出正丁醇相3.6 m L置于含0.1mol·L-1盐酸溶液1.2 m L和正庚烷2 m L的具塞试管中,震荡5 min。弃去有机相,取盐酸相1 m L置入具塞试管中。将1 m L盐酸相用三蒸水稀释1倍,加入0.4 mol·L-1氢氧化钠溶液0.5 m L,混匀并迅速加入含0.1%邻苯二甲醛的甲醇溶液0.1 m L,混匀,于21~22℃反应10 min,加入0.5 mol·L-1盐酸溶液0.5m L酸化,以终止缩合反应并使荧光物质稳定,测定荧光值(激发波长350 nm,发射波长442 nm)。阴性组以重蒸水代替处理后的样品,其加入顺序按上述步骤依次为盐酸溶液、邻苯二甲醛溶液和氢氧化钠溶液。采用紫外分光光度法测定大鼠血清MCT的活力[22-23]。所使用的是由美国Beckman公司生产的Du-600型紫外光分光光度计。MCT活力的测定以N-苯甲酰-DL-精氨酸-对硝基苯胺盐酸盐(BAPNA)为专属性底物。将BAPNA溶于DMSO中,配成20 mg·m L-1 BAPNA溶液,取BAPNA溶液80μL加入到含待测液80μL的01 mol·L-1 Tris-盐酸(p H 7.4)反应缓冲液1.5 m L中,于30℃水浴中反应30 min,加入30%乙酸0.5 m L终止反应,于405 nm处测定吸光度,实验结果见表1。