《表1 RT-qPCR引物序列》

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《比较浓缩生长因子提取液和富血小板纤维蛋白提取液对成骨细胞MC3T3-E1增殖的影响》

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采用定量RT-PCR（quantitative RT-PCR，RT-qPCR）检测培养第3和7天细胞中核心结合蛋白因子2（Runt-related transcription factor 2，Runx2）和成骨细胞特异性转录因子（Osterix，Osx）的m RNA表达水平。将细胞悬液（约1×105个/mL）均匀接种到6孔细胞培养板（1 mL/孔），置于37℃无菌细胞培养箱中培养。按试剂盒说明提取细胞总RNA。加入1 mL的TRIzol反复吹打，静置15 s后，加入氯仿400μL，震荡30 s至乳糜状，静置15 min，在1 200 r/min下离心15 min，弃上清液后加入75%乙醇1 mL，7 500 r/min离心5 min，取沉淀加入12μL DEPC水溶液，配制20μL反转录体系合成cDNA，引物序列见表1。检测各样本Ct值，实验独立重复3次。相对表达量=2-ΔΔCt，ΔΔCt=ΔCt试验-ΔCt对照。在P<0.05的情况下，如果2-ΔΔCt小于1，说明目的基因在实验组中表达下调；大于1说明表达上调；等于1说明表达无差异。