《表2 试验测试结果:霍乱弧菌Ⅵ型分泌系统的效应蛋白对细菌细胞壁的降解机制》
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《霍乱弧菌Ⅵ型分泌系统的效应蛋白对细菌细胞壁的降解机制》
vgr G3和vgr G3C基因以铜绿假单胞菌基因组DNA为模板,通过PCR进行扩增;p ET-28a和p ETSUMO载体片段分别以p ET-28a和p ETSUMO质粒为模板,通过PCR进行扩增。引物由北京擎科新业生物技术有限公司合成(表2)。PCR反应体系(50μL):dd H2O 37μL,上、下游引物(10μmol/L)各1μL,细菌基因组DNA 1μL或者质粒DNA(1 mmol/L) 1μL,Trans Start?Top Taq酶(2.5 U/μL)1μL,d NTPs(2.5 mmol/L)4μL,10×Trans Start?Top Taq Buffer 5μL。PCR反应条件:94°C 5 min;94°C 30 s,60°C 30 s,72°C 3 min,35个循环;72°C 3 min;12°C保存。PCR扩增片段通过Gibson组装的方式连接到p ET-28a或者p ETSUMO载体质粒上,然后导入到E.coli T-Fast和BL21(DE3)感受态细胞中用于验证、扩增和下一步的实验。
图表编号 | XD00210328700 严禁用于非法目的 |
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绘制时间 | 2021.01.20 |
作者 | 王增航、董涛 |
绘制单位 | 上海交通大学生命科学技术学院、上海交通大学生命科学技术学院 |
更多格式 | 高清、无水印(增值服务) |