《表1 实时荧光定量PCR引物序列》

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《不饱和脂肪酸对人脂肪间充质干细胞生物学特性的影响》

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取P3代细胞以4 500 cm-2的密度接种于T-175培养瓶，细胞过夜贴壁后将培养基换成含20μmol/L油酸或亚麻酸的培养基继续培养。细胞融合度达90%后，取1×106个细胞接种到装有2 m L完全培养基的6孔板中，每组重复2个孔，培养24 h后更换特定的诱导培养基进行成脂、成骨、成软骨诱导培养。诱导9 d后根据QIAzol Lysis Reagent说明书分别提取各组ADSCs的总RNA，并用微量分光光度仪检测RNA的浓度和纯度，随后根据逆转录试剂盒将RNA逆转录成c DNA。以c DNA作为模板，以GAPDH为内参，采用Q-PCR检测成脂标志基因PPAR-γ（peroxisome proliferator-activated receptor-γ）、成软骨标志基因SOX9 （SRY-related protein 9）和COL2A1 （typeⅡcollagen-A1）以及成骨标志基因ALP （alkaline phosphatase）、OCN （osteocalcin）、RUNX2 （runt-related transcription factor 2）的m RNA表达水平。上下游引物均是根据NCBI提供的m RNA序列，使用Primer 3 Plus软件设计，由上海生工生物工程股份有限公司最终合成。PCR引物序列见表1。