《表2 组氨酸激酶基因的扩增体系》

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《赤红球菌位点-2蛋白酶类似蛋白底物的筛选及其基因克隆和表达变化分析》

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以赤红球菌SD3的基因组DNA为模板进行扩增组氨酸激酶基因（表2）。上游引物序列为CATAT GCTAGCGCGGCGCTGGTGGCGTT （NheⅠ），下游引物序列为TCGAAGCTT CTCCACCGGCATCCGC（Hind III）。设置的PCR反应条件为：先94℃预变性2 min；随后94℃变性30 s，65℃退火30 s，72℃延伸90 s，此3步骤循环30次，72℃再延伸5 min，于4℃低温保存。通过浓度为1%的琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物的大小与纯度。采用天根的DNA琼脂糖胶回收试剂盒步骤进行切胶回收，将纯化产物与p GM-T克隆载体进行连接，转化至E.coli Top10感受态细胞。挑取白色单菌落至含100μg/m L氨苄青霉素的LB液体培养基中，37℃、180 r/min培养约7 h后，采用菌液PCR进一步鉴定阳性克隆。将阳性克隆培养后提取重组质粒，并进行测序。