《表5 5个地区牦牛肉在多重RT-PCR反应体系中各产物特异性熔解峰Tm》

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《基于单核苷酸多态性位点的多重实时荧光定量聚合酶链式反应法鉴别当雄高山牦牛肉》

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注：/.未出现熔解峰。表6同。

为验证多重RT-PCR反应体系的特异性，随机选取5个地区不同品种牦牛肉样品进行验证，由表5可知，所有样品的Tm均在阳性样品Tm范围内，其中当雄牦牛肉样品熔解曲线峰达到8个，其他4个地区的非当雄牦牛肉样品熔解曲线峰均少于8个。例如，久治牦牛肉样品1缺少体系B中的第3个熔解曲线峰（峰6），可推断该样品在SNP7位点的碱基不是G，或SNP8位点的碱基不是C，因此该方法可以达到通过符合Tm范围的熔解曲线峰的有无来判断各SNP位点的基因型，进而判断样品是否为当雄高山牦牛肉的目的。经过验证，当雄高山牦牛肉样品均出现8个熔解曲线峰，且Tm符合取值范围，而非当雄高山牦牛肉样品熔解曲线峰均少于8个，说明该多重RT-PCR体系具有良好的特异性。