《表1 引物信息：基于转录组探究PacC介导的苹果黑腐皮壳菌致病机制》

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《基于转录组探究PacC介导的苹果黑腐皮壳菌致病机制》

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RNA提取所需样品的采集方法同1.2.1，使用多糖多酚植物RNA提取试剂盒（华越洋，北京）提取苹果树枝和苹果黑腐皮壳菌总RNA，使用第1链c DNA合成试剂盒（Thermo，美国）合成c DNA。本实验选取6个与PCWP降解相关基因进行q RT-PCR验证，利用在线软件（http://bioinfo.ut.ee/primer3-0.4.0/）设计这6个基因的q RT-PCR引物（表1）。以c DNA为模板，以6-磷酸葡萄糖激酶基因（glucose-6-phosphate-dehydrogenase，G6PDH）为内参基因（Yin et al.，2013）进行q RT-PCR扩增。PCR反应体系（20μL）:2×SYBR Master mix 10μL，10μmol/L正反向引物各0.4μL，c DNA模板1μL，dd H2O8.2μL。PCR反应程序：95℃5 min；95℃10 s，58℃30 s，72℃30 s，40循环；95℃15 s，65℃60s，97℃15 s；37℃30 s。每个样品进行3次生物学重复。利用2-ΔΔCt方法计算基因的相对表达量。