《表2 引物序列:白藜芦醇对氧化应激仔猪回肠黏膜形态、抗氧化能力、紧密连接蛋白及炎性因子mRNA表达的影响》
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《白藜芦醇对氧化应激仔猪回肠黏膜形态、抗氧化能力、紧密连接蛋白及炎性因子mRNA表达的影响》
采用实时荧光定量PCR检测肠黏膜闭锁小带蛋白-1(ZO-1)、闭锁蛋白(Occludin)和跨膜蛋白(Claudin)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-10(IL-10)的mRNA相对表达量。RNAiso Plus试剂盒提取回肠黏膜组织总RNA,利用超微量分光光度计测定仪检测RNA浓度,吸光度在OD260/OD280=1.8~2.2表示RNA纯度较高;采用琼脂糖凝胶电泳鉴定RNA品质,电泳后可见28s、18s和5s的小分子条带则说明RNA完整性较好,之后保存于-80℃备用。HiScriptⅢRT SuperMix for qPCR试剂盒说明进行cDNA的合成,得到的cDNA于-20℃保存备用。以反转录的cDNA为模板扩增基因,进行实时荧光定量PCR(Vazyme Biotech)检测。反应程序为:95℃30 s→95℃10 s→60℃30 s(40个循环);熔解曲线95℃15 s→60℃60 s→95℃15 s。甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)为内参,采用2-ΔΔCt法计算各组基因的mRNA相对表达量。利用Premier 5.0软件设计引物,引物序列见表2[16-17]。
图表编号 | XD00192931600 严禁用于非法目的 |
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绘制时间 | 2021.02.01 |
作者 | 符清瑶、施力光、周汉林、曹婷、马中华、姜宏正、荀文娟 |
绘制单位 | 海南大学动物科技学院、中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所、中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所、中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所、海南大学动物科技学院、海南大学动物科技学院、海南大学动物科技学院、中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所 |
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