《表1 实验用到的引物名称和序列》

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《坛紫菜泛素连接酶PhCUL1基因克隆与功能验证》

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根据坛紫菜转录组的注释结果，筛选出一条注释结果为脐形紫菜（Porphyra umbilicalis） CUL1的Unigene0010232。根据序列设计1对扩全长引物（正向引物加KpnⅠ酶切位点序列，反向引物加XbaⅠ酶切位点序列，便于后续实验） Ph CUL1F和Ph CUL1R（表1），PCR扩增Ph CUL1基因的保守序列，预期长度为2481 bp；扩增体系为25?l:2×Mix 12.5?l，dd H2O 9.5?l，每条引物0.5?l，c DNA模板2?l。PCR扩增程序：95℃变性5 min；95℃40 s；62℃30 s；72℃2 min 30 s，35个循环；72℃，延伸10 min。将扩增产物割胶回收、转化和测序，验证全长克隆的正确性。