《表1 实时荧光定量PCR引物对》
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《高盐刺激可诱导巨噬细胞极化从而促进肾脏成纤维细胞的增殖及表型转化》
收集高盐处理前后的巨噬细胞,用Trizol、氯仿、异丙醇提取细胞总RNA,采用核酸分析仪测定提取RNA浓度和A260/280比值。根据实时荧光定量PCR试剂盒操作说明将RNA以25℃5 min,42℃30 min;85℃5 min的条件进行逆转录,逆转录所得产物于-80℃低温保存。采用SYBR Green法进行荧光定量PCR反应:预变性(1cycle),95℃30 s;PCR反应(40 cycle),95℃5 s,60℃20 s;溶解(dissociation),55~95℃,每0.5℃10 s。分别检测M1型巨噬细胞相关基因白介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和M2巨噬细胞相关基因甘露糖受体(MR)和精氨酸酶(Arg)的m RNA表达。采用2-??Ct法分析相对表达量。收集正常组及高盐组细胞培养液,用RT-q PCR检测培养液中白介素6(IL-6)及转化生长因子β(TGF-β1)的m RNA表达。引物序列如下。
图表编号 | XD00187736900 严禁用于非法目的 |
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绘制时间 | 2020.10.20 |
作者 | 陆静、白志勋、匡晓燕、李玲 |
绘制单位 | 遵义医药高等专科学校病理教研室、遵义医科大学第二附属医院肾内科、遵义医药高等专科学校病理教研室、遵义医药高等专科学校病理教研室 |
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