《表2 引物序列表：地中海贫血患者血浆环状RNA的筛查及结果分析》

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《地中海贫血患者血浆环状RNA的筛查及结果分析》

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提取实验组、对照组血浆总RNA，逆转录合成c DNA。根据上一步筛选差异表达的circ RNA，使用Primer 5.0，进行引物设计，见表2。PCR反应体系：2×Master Mix 5μL，10μmol/L的PCR特异引物F 0.5μL，10μmol/L的PCR特异引物R 0.5μL，c DNA 2μL，加水至总体积为10μL。按照PCR操作步骤进行扩增，95℃，10 min；40个PCR循环[95℃，10 s；60℃，60 s （收集荧光）]。为了建立PCR产物的熔解曲线，扩增反应结束后，按95℃，10 s-60℃，60 s-95℃，15 s的顺序加热；并从60℃缓慢加热到99℃（仪器自动进行-Ramp Rate为0.05℃/s）。反应结束后确认扩增曲线和熔解曲线，将阈值手定设定在0.015。