《表1 TkSRPP/REF家族基因扩增和表达分析PCR引物》

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《橡胶草SRPP/REF家族基因的鉴定及表达分析》

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将生长三个月的橡胶草组培苗进行水培3 d，然后用0.5 mol·L-1茉莉酸甲酯进行处理，整个实验处理方法参考Cao等（2017），分别在0 h（未处理组）、6 h和24 h（处理组）进行样品采集，立即液氮速冻，保存在-80oC冰箱。根总RNA提取使用EasyPure Plant RNA Kit（TRAN，北京）试剂盒。以RNA为模板使用EasyScript One-Step gDNA Removal Kit and cDNA Synthesis Supermix（TRAN，北京）试剂盒的Anchored Oligo（dT）18来合成第一链cDNA，未处理组2个生物学重复，处理组3个生物学重复。利用Primer 5.0设计TkSRPP4和TkREF1基因特异性定量引物（表1）。使用LightCycler 480 system仪器进行实时定量聚合酶链式反应（qRT-PCR），实验试剂使用LightCycler 480 SYBR Green|Master Mix（Roche）Mix，共10μL反应体系。以GAPDH基因为内参，反应程序设计为预变性95oC 5 min，变性95oC 10 s，退火52oC 10 s，延伸72oC 25 s，共45个循环，每个样品3个实验重复。采用2-??CT法进行相对表达量分析。利用GraphPad Prism 8软件进行数据的统计学分析和绘图。基于实验已有的茉莉酸甲酯转录组数据获得TkSRPP/REF家族基因的FPKM值。以2为底的对数来进行统计学数据分析，热图的绘制使用R软件pheatmap包。