《表1 实时荧光定量PCR的引物序列》
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《黄芪三七合剂通过调控Arid2-IR/NF-κB信号轴改善糖尿病肾病小鼠肾炎症反应》
取小鼠肾组织0.05 g,用总RNA提取试剂盒提取RNA,Thermo Fisher NANODROP 2000分光分度计上检测RNA浓度,按照Go ScriptTMReverse Transcription System(A5001)说明书进行逆转录操作。cDNA合成反应体系为:RNA 2.5μg,Primer Oligo(d T)1μL,Random Primer 1μL,Nuclease-Free Water定容到5μL,混匀离心,70℃5 min,冰浴5min,离心10 s;之后按照说明书制备逆转录反应体系:5×Reaction Buffer 4μL,PCR Nucleotide Mix 1μL,Go ScriptTMReverse Transcriptase 1μL,Mg Cl2(Final concentration 2.5 m M)1μL,Nuclease-Free Water 8μL,轻打混匀。将c DNA 5μL和逆转录体系15μL混合,离心后25℃5 min,4℃1 h,70℃15 min,反应完毕加入80μL Nuclease-Free Water稀释样品,-20℃保存备用。Light Cycler480 II上检测Arid2-IR、TNF-α、MCP-1和IL-1β的表达量,引物信息如表1,检测到的基因相对水平用β-actin正常化。
图表编号 | XD00179273600 严禁用于非法目的 |
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绘制时间 | 2020.06.30 |
作者 | 林晓、李健春、谭睿陟、文丹、谢席胜、王丽 |
绘制单位 | 西南医科大学附属中医医院中西医结合研究中心、西南医科大学附属中医医院中西医结合研究中心、西南医科大学附属中医医院中西医结合研究中心、西南医科大学附属医院肾病内科、南充市中心医院肾病科、西南医科大学附属中医医院中西医结合研究中心 |
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