《表2 PCR相关引物序列》

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《尼古丁对多种干细胞中烟碱型乙酰胆碱受体表达的影响》

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细胞接种于6孔板用PBS洗3次之后，每孔加入1 mL TRIzol，冰上裂解5 min，然后收集到EP管，每管加入氯仿200 mL，震荡后室温静置10 min，随后4℃、12 000 r/min离心15 min，取上清于新的EP管，加入500 mL异丙醇，震荡15 s，静置10 min，4℃、12 000 r/min离心15 min，弃上清。加入1 mL冷75%乙醇，混合后4℃、7 500 r/min离心5 min，弃上清，重复2次，适度晾干，加入适量无酶水溶解，测浓度。根据逆转录试剂盒进行转录得到cDNA。PCR条件：93℃预变性；93℃40 s、58℃30 s、72℃60 s进行35次循环；72℃保温7 min。引物序列见表2。产物进行琼脂糖凝胶电泳。