《表1 引物名称及序列:月季RhNAC31互作蛋白的筛选及分析》
参考Dai等(2012)和Jeong等(2009)的方法,将RhNAC31的转录激活区域C端(157~286aa)划分为2个片段:RhNAC31-C1(157~250 aa)和RhNAC31-C2(251~286 aa)。分段设计带有酶切位点的引物扩增RhNAC31 C端的2个片段(表1),1%琼脂糖凝胶电泳检测,利用TaKaRa Mini BESTAgarose Gel DNA Extraction Kit试剂盒(大连TaKaRa公司)回收目的条带。将回收产物与克隆载体pMD18-T连接,连接产物转化大肠杆菌DH5α中。挑取单菌落鉴定,根据菌落PCR结果,将鉴定出的阳性克隆交由青岛派森诺生物科技股份有限公司测序。将测序正确序列利用上海生工生物有限公司SanPrep柱式质粒DNA小量抽提试剂盒(NO.B518191)提取质粒。采用限制性内切酶Eco RⅤ和Bam HⅠ构建酵母pGBKT7表达载体。通过测序验证重组诱饵载体pGBKT7-RhNAC31-C1和pGBKT7-RhNAC31-C2构建成功。
图表编号 | XD00178093800 严禁用于非法目的 |
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绘制时间 | 2020.07.25 |
作者 | 丁爱琴、韩坤桀、杨立晨、张竹君、耿子雯、付鲁峰、刘庆华、姜新强 |
绘制单位 | 青岛农业大学园林与林学院、北京林业大学园林学院、青岛农业大学园林与林学院、青岛农业大学园林与林学院、青岛农业大学园林与林学院、青岛农业大学园林与林学院、青岛农业大学园林与林学院、青岛农业大学园林与林学院、青岛农业大学园林与林学院 |
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