《表1 LAMP-PCR技术体系、检测目标病原菌、灵敏度与引物序列》

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《江苏地区小麦赤霉病菌种群检测与抗药性分析》

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本研究越冬稻桩取样地点为江苏省盐城市、溧阳市和通州市，共计15份。本试验于江苏丘陵地区镇江农业科学研究所实验室进行室内子囊孢子的鉴定与抗药性检测。刮取每份样品稻桩上黑色子囊壳部分溶解于无菌水中，使用血球计数板检测子囊孢子浓度，并稀释合理倍数至每个PDA[28-29]培养皿（9 cm）中萌发出10～20个赤霉病菌单菌落，挑取赤霉病单菌落菌丝于另一个培养皿中培养至铺满整个培养皿为止。刮取PDA培养基表面上全部菌丝于2 mL离心管中，液氮条件下使用磨样机磨成粉状物，提取该菌落的全基因组DNA。全基因组DNA提取采用北京全式金生物技术公司产品EasyPure Plant Genomic DNAKit完成。LAMP-PCR技术体系（上海生工生物工程有限公司等温扩增PCR混合液（通用型））、检测目标病原菌、灵敏度与引物序列如表1所示。本研究PCR体系（25μL）如下：2×Lamp Master Mix，12.5μL；FIP（10μmol/L），2μL；BIP（10μmol/L），2μL；L B（10μmol/L），1μL；F3（10μmol/L），0.5μL；B3（10μmol/L），0.5μL；DNA，25～100 ng；DNAPolymerase，0.5μL；ddH2O，补足至25μL。检测方法为琼脂糖电泳检测，显示不同大小条带组成的LAMP特征图谱。