《表2 慢病毒包装系统Tab 2 The packaging system of lentivirus》

  提示：宽带有限、当前游客访问压缩模式

本系列图表出处文件名：随高清版一同展现

《利用CRISPR/Cas9慢病毒系统构建肺部EZH2基因敲除小鼠》

1. 获取 高清版本忘记账户？点击这里登录

1. 下载图表忘记账户？点击这里登录

Use 150 mm plate，packing plasmid 1 is ps PAX2（7.5μg），package plasmid 2 is p MD2.G（5μg），target plasmid is 10μg.

293T细胞用含10%胎牛血清的高糖DMEM培养基于5%CO2，37 oC恒温培养，待细胞密度为大约70%时，质粒经PEI试剂瞬时转染到293T细胞中，此时换为无血清培基。此次病毒包装用三质粒包装系统，包装质粒为p MD2.G和ps PAX2，目的质粒为p-sg RNA-Lac Z、p-sg RNA-Ezh2-1、p-sg RNA-Ezh2-2。因为实验目的质粒中并无可观察或筛选的标签，无法通过荧光观察或者药物筛选，因此加一个对照目的质粒iluc，此质粒包含绿色荧光蛋白GFP，可观察到绿色荧光，因此便于观察包装系统有无问题。相应的病毒命名为v-iluc、v-sg RNA-Lac Z、v-sg RNA-Ezh2-1、v-sg R NA-Ezh2-2（表2）。293T细胞转染质粒48 h后收集含病毒颗粒的细胞上清，使用低温超速离心机50，000g，2 h浓缩，然后弃掉上清，用300μL PBS复溶，放在4 oC冰箱过夜，使病毒溶解充分，-80 oC保存备用，避免反复冻融。