《表2 构建不同信号肽人鼠嵌合CMV-IgM的引物序列》

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《不同信号肽对人鼠嵌合CMV-IgM分泌表达的影响》

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以1.2.3中阳性克隆的质粒为模板，分别使用引物SigF-F、Overlap-H-R和SigF-F、Overlap-L-R（表2）扩增，获得带CMV 6#自身信号肽的轻重链可变区基因序列；与本实验室合成的人IgM重链恒定区编码序列（Overlap-H-F、H-R扩增获得）和人Kappa轻链恒定区编码序列的PCR产物（Overlap-L-F、L-R扩增获得）进行拼接，分别获得人鼠嵌合CMV-IgM基因的重链和轻链完整目的基因序列。用HindⅢ和XbaⅠ对重/轻链目的基因及载体pCMV3进行酶切，并连接获得带自身信号肽的质粒CMV-MH-pCMV3和CMV-L-pCMV3（图1），送生工生物工程（上海）股份有限公司测序，验证目的基因正确性。