《表1 用于PCR扩增的引物》

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《RNA干扰20S蛋白酶体α亚基基因对莱茵衣藻油脂代谢的影响》

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用HSM培养基把莱茵衣藻CC425培养至对数生长期，于3 500×g下离心5 min收集藻细胞，采用Glass Beads的方法[23]转化莱茵衣藻。转化后将藻株转移至50 mL无菌离心管中，于24℃黑暗温育过夜。在3 500×g下离心5 min收集藻细胞，添加500μL TAP培养基重悬，涂布于含L-色氨酸和paromomycin的TAP固体平板，吹干后置于光照培养箱中培养6～8 d。挑取单克隆，接种到含5-Fluoroindole的TAP固体平板上复筛。采用CTAB法提取基因组DNA，根据载体正反向重复序列骨架，用Primer 5设计特异性引物，PCR扩增，检测目标片段是否插入莱茵衣藻基因组DNA中。选取CC425、maa7转基因藻株和3个CrPOA1 RNAi转基因藻株于HSM培养基培养4 d，Trizol试剂法提取藻株总RNA，反转录成cDNA，以18S rRNA基因做内参，分析藻株CrPOA1 m RNA水平。采用2–△△CT法进行相对定量计算，用SPSS 22.0进行显著性分析。