《表2 P53和PARP1基因的m RNA表达水平的RT-PCR引物》

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《山奈酚对胃癌细胞PARP1以及P53基因表达的影响研究》

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实验处理前后将胃癌细胞组织取样迅速置于液氮中然后放到-80℃冰箱保存，总RNA提取使用TRIzol试剂盒（北京Solarbio科技有限公司），并严格按照说明书操作。提取后，测定RNA的浓度和质量。本研究的引物是由TaKaRa Bio公司合成（表2）。然后根据互补DNA（cDNA）逆转录试剂盒说明书进行逆转录。其反应条件包括逆转录反应和逆转录酶失活反应，分别设置在42℃30 min，85℃5 s。将反转录的cDNA稀释成50 ng/μL再用cDNA用作模板进行PCR反应，使用荧光定量PCR仪（中国广州大安基因有限公司）。反应条件为95℃预变性4 min，95℃变性30个循环30 s，57℃退火30 s，72℃延伸30 s。基因的相对转录水平（表达量）计算使用2-ΔΔCt方法（Ayuk et al.，2016），磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）作为内参基因。