《表1 引物序列表：补肾填精法对肾精亏虚孕鼠脾脏及TLR4/MyD88/NF-κBp65免疫通路的影响》

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《补肾填精法对肾精亏虚孕鼠脾脏及TLR4/MyD88/NF-κBp65免疫通路的影响》

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取孕鼠脾脏组织，采用Trizol法提取总RNA，逆转录，并用RT-PCR法测定上述三种mRNA的表达水平，引物参见表1。逆转录体系：5μg RNA、2μl Oligo（dT）18（10μM）、4μl dNTP（2.5 mM）、4μl 5×Hiscript Buffer、1μl Hiscript Reverse Transcriptase、0.5μl Ribonuclease Inhibitor，补ddH2O(Rnase free）至体积为20μl。逆转录反应条件：25℃5min，50℃15min，85℃5min，4℃10min。RT-PCR体系：4μl cDNA(8×稀释）、0.4μl上游引物、0.4μl下游引物、10μl SYBR Green Master Mix、0.4μl 50×ROX Reference Dye 2、4.8μl H2O。RT-PCR条件：50°C 2 min，95°C 10 min；40个循环条件：95°C 30 sec，60°C 30 sec。数据以2-ΔΔct法分析。