《表1 ApoM基因rs805264、rs707922和rs707921位点引物和探针序列Tab 1 Sequences of primers and probes of apoM gene rs80

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《载脂蛋白M基因单核苷酸多态性与慢性阻塞性肺疾病的相关性分析》

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The underlined part is the mutation site.Primer 1:The amplification primer of rs805264 locus；Primer 2:The shared amplification primer of rs707922 and rs707921 loci.ApoM:Apolipoprotein M；FAM:Carboxy-fluorescein

采用碱基淬灭探针技术检测SNP。rs805264、rs707922及rs707921位点的上游引物、下游引物和探针见表1，其中下划线部分为突变位点。引物和探针均由生工生物工程（上海）股份有限公司合成。PCR总反应体系为25μL，含2μL模板DNA、2.5μL 10×缓冲液、1.5μL 25μmol/L MgCl2、0.5μL 4×d NTPs、0.25μL5 U/μL Taq DNA聚合酶、17.95μL ddH2O、100μmol/L上下游引物各0.1μL和10μmol/L探针0.1μL。PCR在德国罗氏公司Light Cycler?480型实时荧光定量PCR仪上进行。循环反应条件为95℃变性2 min，95℃2 s，60℃1 min，温度转换率均为20℃/s，共40个循环；扩增产物的熔解曲线分析条件为95℃30 s、25℃4 min，逐渐升至70℃时，温度转换率均为0.1℃/s，并持续收集荧光数据。