《表1 用于构建ch NLRX1原核表达质粒的引物》

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《鸡NLRX1受体基因的原核表达及抗体制备》

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运用DNAStar软件对NLRX1基因编码区和N端基因序列预测编码的抗原表位进行分析，以本实验室构建的p EGFP-NLRX1重组质粒为模板，设计引物（见表1）通过PCR方法分别扩增NLRX1基因N端1～492 bp截短片段（命名为NLRX11-492）和完整ORF序列（NLRX1）。PCR扩增条件：96℃5 min；96℃30 s，60℃1.5 min，72℃15 s，共30个循环。回收扩增产物并纯化，NLRX11-492与pET-32a（+）原核表达载体分别经EcoR I、Sal I双酶切，NLRX1与pET-32a（+）原核表达载体分别经Kpn I、Sal I双酶切，切胶回收后连接、转化E.coli Rosetta感受态细胞，经菌液PCR和双酶切鉴定将阳性克隆分别命名为NLRX1/pET-32a和NLRX11-492/p ET-32a重组质粒。