《表1 方案一不同染色结果》

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《牛体外受精囊胚双重染色方法的优化》

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去透明带的牛囊胚在10μg/m L Hoechst33342中染色30 min后，很大概率在随后的处理过程中发生碎裂，因而实验中将Hoechst33342染色时间调整为5~10 min。按照李瑞岐等[12]的方法，对Hoechst33342、Triton X-100、PI不同浓度及处理时间的牛囊胚双重染色结果见表1。用Hoechst33342处理30 min、Triton X-100处理60 s、PI处理10 min，进行染色时囊胚细胞几乎全部染为红色，染色结果见图1C；调整Triton X-100处理时间为60 s、PI处理时间为1 min时囊胚细胞仍几乎全部染为红色，染色结果见图1D；调整Triton X-100处理时间为30 s、PI处理时间为30 s时能将ICM细胞与TE细胞基本分别染上色，染色结果见图1E；当继续降低Triton X-100处理时间为18 s、PI处理时间为20 s时表现为PI着色浅的现象，而且囊胚细胞多数为蓝色，染色效果见图1F。因而当Triton X-100与PI处理时间都定为30s时，运用此方法基本上能够达到牛囊胚双重染色的效果，由于每次重复照片都比较模糊，因而无法对ICM与TE进行统计分析。