《表1 大肠埃希菌毒力相关基因fim、usp、hlyA的引物序列》
按随机数字表法选取A、B、C3组尿液(n=8)和导管(肾盂段,n=6)细菌培养为大肠埃希菌阳性标本,选择未使用导管(n=6)和健康成年男性(n=8)尿液为对照组。RT‐PCR检测细菌毒力相关基因fim、usp、hlyA的表达。无菌双J管用于对照组实验。RT‐PCR步骤:总RNA的提取参照试剂盒说明书操作,酶标仪用于测定核酸的纯度,逆转录试剂盒将RNA逆转为cDNA后,PCR试剂盒配置为20μL体系:10μL PCR Mix,2μL cDNA,上下引物各1μL,6μL无RNase水。扩增程序:2 min,94℃预变性,94℃变性30 s,fim、usp、hlyA和β‐actin退火分别为58、59、56和55℃,30 s,72℃延伸30 s,终延伸72℃5 min。反应结束后,取fim、usp、hlyA和β‐actin扩增产物各5μL分别与6×Loading Buffer 1μL混合,2%琼脂糖凝胶电泳鉴定,使用Image J软件对电泳图片进行灰度值统计分析。扩增的引物见表1。
图表编号 | XD00132707700 严禁用于非法目的 |
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绘制时间 | 2020.05.15 |
作者 | 石从整、周琼、蒋立新、冯进、罗恒 |
绘制单位 | 贵州医科大学、贵州医科大学、贵阳市第一人民医院泌尿外科、贵阳市第一人民医院泌尿外科、贵阳市第一人民医院泌尿外科 |
更多格式 | 高清、无水印(增值服务) |