《表3 BestKeeper软件用于内参基因两两相关性比较》

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《葡萄实时荧光定量PCR稳定内参基因的筛选和验证》

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BestKeeper软件最多只能比较100个样品中10个内参基因和10个目标基因的表达水平（Pfaffl et al.，2004）。本研究通过GeNorm和NormFinder对19个内参基因稳定性进行分析，两种软件分析获得稳定性前十名的内参基因种类相同，均为：GAPDH、UBQ-1、EF1α-1、Tubulin、EF1α-2、GAPDH-2、AP47、PP2A、UBC和Actin（图3；表1）。因此，采用BestKeeper软件对这10个内参基因稳定性进行分析，计算各内参基因标准偏差（SD）、变异系数（CV）和相关系数（r）。SD和CV值越小，r值越大则内参基因稳定性越好。而SD>1时则基因稳定性较差。结果表明，本研究10个内参基因SD值均小于1，其中SD值和CV值由小到大即稳定性排名前4名的基因均为：EF1α-1、UBC、UBQ-1和GAPDH（表2）。相关性分析表明，EF1α-1、UBQ-1和GAPDH3个基因相关性强，UBC基因与其余3个基因相关性差（表3）。因此，综合BestKeeper软件SD值、CV值和相关性分析，稳定性最好且相关性强的前3个内参基因为EF1α-1、UBQ-1和GAPDH。