《表1 qPCR所用引物及其序列》

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《甘蓝PMEI家族基因结构、基因组分布和表达分析》

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基于甘蓝PMEI基因家族的FPKM结果，利用TBtools工具绘制表达热图进行表达聚类分析。利用荧光定量PCR进一步确定从数据表达谱筛选出的9个表达差异较大的PMEI家族基因在授粉后的表达模式。选取试验处理材料，提取总RNA（RNAprep pure plant kit，Tiangen Co.Ltd.，China）并反转录为cDNA(Prime Script 1st Strand cDNA Synthesis Kit，TaKaRa）。Quantitative Real-time PCR于BIO-Rad CFX Connect Real-Time PCR System上进行[SYBR Premix Ex TaqⅡ（Tli RNaseH Plus）kit，TaKaRa]。以未授粉雌蕊，自花授粉15、30和60 min和异花授粉15、30和60 min的雌蕊cDNA为模板，dActin为内参（表1），在荧光定量PCR仪上对目的基因进行荧光定量PCR反应。反应体系为20μL，含2×SYBR Premix Ex Taq 10μL，引物各0.5μL，cDNA模板2μL，加超纯水至20μL。扩增程序为95℃预变性30 s；95℃5 s，58℃10 s，72℃30 s，共40个循环。采用2–ΔΔCT法计算目的基因的相对表达水平，引物序列见表1。