《表1 RT-PCR引物序列》

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《黄芩抑制鸡传染性支气管炎病毒增殖的作用机制研究》

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将病毒100μL和最大无毒浓度的黄芩乙醇提取物6μL在室温环境中混合20 min，侵染细胞24 h后提取总RNA，RT-PCR检测细胞内OASL、IFI27、STAT1的表达，并与只用病毒侵染未加药物处理的细胞内OASL、IFI27、STAT1的表达量做比较。同时设置阳性对照，即未经任何处理的H1299细胞中OASL、IFI27、STAT1的表达。RT-PCR试验操作步骤如下：（1）总RNA提取及cDNA合成：按照Trizol法试剂盒提取总RNA，超微量核酸蛋白检测仪测定RNA浓度；按照反转录试剂盒说明合成cDNA，-20℃保存。（2）PCR：以cDNA为模板进行PCR扩增，反应条件为：94℃3 min；94℃30 s，62℃30 S，72℃30 s，共30个循环；扩增产物用1.0%琼脂糖凝胶电泳检测。相关引物由华大基因公司合成，引物序列详见表1。